Sequenciamento de DNA

O sequenciamento de DNA ^{(português brasileiro)} ou sequenciação de ADN ^{(português europeu)} é uma série de métodos bioquímicos que têm como finalidade determinar a ordem das bases nitrogenadas adenina (A), guanina (G), citosina (C) e timina (T) da molécula de DNA.

Máquinas que realizam o sequenciamento de DNA

Métodos de sequenciamento

O método tradicional de sequenciamento de DNA foi proposto por Frederick Sanger na década de 70 e consiste na adição de nucleotídeos modificados, chamados didesoxirribonucleotídeos, que impedem o crescimento de um fragmento de DNA em replicação pela DNA polimerase após sua adição. Tem sido largamente utilizado por centros de pesquisa ao redor do globo.

O método de pirosequenciamento consiste em uma nova abordagem molecular do sequenciamento e se beneficia de uma técnica capaz de captar a emissão de luz causada pela adição de uma luciferase, acoplada à polimerização do DNA previamente fragmentado e aderido a microesferas, com o uso de sequências adaptadoras.

Método de Sanger

Gráfico de sequenciamento de DNA

Pelo método de Sanger, uma fita simples de DNA que será sequenciada, é hibridizada com um Primário (tinta) de desoxinucleotídeos marcado na ponta 5´ (cinco linha). Quatro misturas de reação são preparadas onde os Primário (tinta)s utilizados serão elongados por uma DNA polimerase. Cada mistura contém os quatro desoxinucleosídeos trifosfato normais mais um dos quatro didesoxinucleosídeos trifosfato em uma razão de aproximadamente 1/100. Uma vez que um didesoxinucleotídeo não tem ponta 3´-OH, não é possível haver elongação a partir do nucleotídeo adicionado, parando a reação. Desta forma, cada mistura de reação produzirá cadeias prematuramente terminadas de acordo com toda ocorrência de um didesoxinucleotídeo adicionado. Cada mistura é então separada em um gel de sequenciamento por eletroforese para se detectar cada um dos nucleotídeos presentes na sequência de DNA lida.

Métodos modernos - 454

Um novo método de sequenciamento de DNA, usualmente chamado de pirosequenciamento, foi desenvolvido pela Roche Applied Sciences . Através deste método, pode-se sequenciar genomas de organismos diversos de uma maneira muito mais rápida e barata.

Bibliografia

• Darnell, J., Lodish, H., Baltimore, D.. **Molecular Cell Biology.** Second Edition. Scientific American Books. Distributed by W. H. Freeman and Company, New York. p. 213. 1990.

Ligações externas

• http://www.lgcm.icb.ufmg.br/sequenciamento.php (Esquema dos métodos de Sanger e de pirosequenciamento)