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Resazurina

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Resazurina
Alerta sobre risco à saúde
Nome IUPAC 7-hydroxy-10-oxidophenoxazin-10-ium-3-one
Identificadores
Número CAS 550-82-3
PubChem 11077
ChemSpider 10606
SMILES
InChI
1/C12H7NO4/c14-7-1-3-9-11(5-7)17-12-6-8(15)2-4-10(12)13(9)16/h1-6,14H
Propriedades
Fórmula química C12H7NO4
Massa molar 229.17 g mol-1
Solubilidade em água soluble
Riscos associados
Frases R R22 R36/37/38
Página de dados suplementares
Estrutura e propriedades n, εr, etc.
Dados termodinâmicos Phase behaviour
Solid, liquid, gas
Dados espectrais UV, IV, RMN, EM
Exceto onde denotado, os dados referem-se a
materiais sob condições normais de temperatura e pressão
Referências e avisos gerais sobre esta caixa.
Alerta sobre risco à saúde.

A resazurina (7-hidroxi-3H-fenoxazina-3-ona 10-óxido) é um corante azul, fracamente fluorescente,[1] redutível a resorufina, um corante rosa com altíssima fluorescência em vermelho. É usado como um indicador de oxirredução em ensaios de viabilidade celular para células bacterianas e de mamíferos assim como para medir respiração aeróbica e trocas na zona hiporreica em córregos. É disponível comercialmente, normamelmente, como um sal de sódio.

A solução de reszurina possui um dos maiores valores conhecidos do índice de dicromatismo de Kreft.[2] Isso significa que há uma grande mudança no matiz percebida quando a espessura ou concentração da amostra aumenta ou diminui.

Ensaios de viabilidade celular

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A resazurina foi usada pela primeira vez para quantificar o conteúdo bacteriano no leite por Pesch e  Simmert em 1929.[3] É utilizado atualmente também como um indicador de viabilidade celular de células de mamífero em cultura.[4]

Ensaios baseados em resazurina apresentam excelente correlação com ensaios de referência, como os ensaios baseados em formazan (MTT/XTT) e técnicas baseadas em timidina tritiada, sendo mais fácil e seguro de utilizar.[5] Ele também permite estudos mais longos (pois é pouco tóxico), e funciona para células aderentes, bactérias e fungos.[5] Além das aplicações padrão em ensaios de cultura celular (contagem e proliferação de células[6]) e testes de citotoxicidade, ela pode ser multiplexada também com diversos ensaios quimioluminescentes, como ensaios de citocinas, de caspase (para medir apoptose) e ensaios repórters para medir a expressão de um gene ou proteína.[5] A reação irreversível deresazurina a resorufina é proporcional à respiração aeróbica.[7]

Outras aplicações

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A resazurina é efetivamente reduzida nas mitocôndrias, o que torna-a útil para estudar a atividademetabólica mitocondrial.

Normalmente, na presença de NADPH dehidrogenase ou NADH dehidrogenase como enzima, NADPH ou NADH são os redutores que convertem resazurina a resorufina. Sendo assim, o sistema resazurina/diaforase/NADPH pode ser usado para detectar os níveis de NADH, NADPH, ou diaforase, assim como qualquer atividade bioquímica ou enximática que envolva uma reação que gere NADH ou NADPH.[8][9][10][11][12]

Resazurina pode ser usada para medir L-Glutamato também, com sensitividade de 2.0 pmol por poço.[13]

A resazurina é utilizada para medição de respiração aeróbica em córregos[14] Como a maior parte da respiração aeróbica ocorre no leito do rio, a conversão de resazurina a resorurfina também pode representar a dimensão da troca entre a coluna de água e o leito do córrego.

Redução de resazurina a resorufina em células vivas (com NADH)

Síntese

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A resazurina é preparada através de condensação catalisada por ácido de resorcinol e 4-nitrosoresorcinol seguida por oxidação do intermediário com óxido de manganês (IV):

Resazurin synthesis
Resazurin synthesis

O tratamento do produto da reação final com carbonato de sódio gera o sal sódico de resazurina, que é a forma comercial típica do composto. A condensação em álcool também é possível, mas apresenta rendimento menor, não ocorrendo em níveis satisfatórios em água ou ácido acético[15]

Notas

  • Este artigo foi inicialmente traduzido, total ou parcialmente, do artigo da Wikipédia em inglês cujo título é «Resazurin», especificamente desta versão.

Referências

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  1. ↑ Bueno, C.; Villegas, M. L.; Bertolotti, S. G.; Previtali, C. M.; Neumann, M. G.; Encinas, M. V. (2002). «The Excited-State Interaction of Resazurin and Resorufin with Aminesin Aqueous Solutions. Photophysics and Photochemical Reaction». Photochemistry and Photobiology. 76 (4): 385–90. PMID 12405144. doi:10.1562/0031-8655(2002)0760385TESIOR2.0.CO2 
  2. ↑ Kreft, Samo; Kreft, Marko (2009). «Quantification of dichromatism: A characteristic of color in transparent materials». Journal of the Optical Society of America A. 26 (7): 1576–81. Bibcode:2009JOSAA..26.1576K. PMID 19568292. doi:10.1364/JOSAA.26.001576 
  3. ↑ Pesch, K. L.; Simmert, U. (1929). «Combined assays for lactose and galactose by enzymatic reactions». Milchw. Forsch. 8. 551 páginas 
  4. ↑ Anoopkumar-Dukie, S; Carey, JB; Conere, T; O'Sullivan, E; Van Pelt, FN; Allshire, A (2005). «Resazurin assay of radiation response in cultured cells». British Journal of Radiology. 78 (934): 945–7. PMID 16177019. doi:10.1259/bjr/54004230 
  5. ↑ a b c UptiBlue viable cell assay technical manual
  6. ↑ Kurin, Elena; Atanasov, Atanas; Donath, Oliver; Heiss, Elke; Dirsch, Verena; Nagy, Milan (2012). «Synergy Study of the Inhibitory Potential of Red Wine Polyphenols on Vascular Smooth Muscle Cell Proliferation». Planta Medica. 78 (8): 772–8. PMID 22499559. doi:10.1055/s-0031-1298440 
  7. ↑ González-Pinzón, Ricardo; Haggerty, Roy; Myrold, David D. (2012). «Measuring aerobic respiration in stream ecosystems using the resazurin-resorufin system». Journal of Geophysical Research. 117 (G3): G00N06. Bibcode:2012JGRG..117.0N06G. doi:10.1029/2012JG001965 
  8. ↑ Shahangian, S.; Ash, K. O.; Rollins, D. E. (1984). «An Enzymatic Method for the Analysis of Formate in Human Plasma». Journal of Analytical Toxicology. 8 (6): 273–6. PMID 6549198. doi:10.1093/jat/8.6.273 
  9. ↑ Hanson, NQ; Freier, EF (1983). «Effect of protein on the determination of total bile acids in serum». Clinical Chemistry. 29 (1): 171–5. PMID 6571720 
  10. ↑ De Jong, Donald W.; Woodlief, William G. (1977). «Fluorimetric assay of tobacco leaf dehydrogenases with resazurin». Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Enzymology. 484 (2): 249–59. PMID 20957. doi:10.1016/0005-2744(77)90081-X 
  11. ↑ Barnes, Stephen; Spenney, Jerry G. (1980). «Stoichiometry of the nadh-oxidoreductase reaction for dehydrogenase determinations». Clinica Chimica Acta. 107 (3): 149–54. PMID 6893684. doi:10.1016/0009-8981(80)90442-8 
  12. ↑ Winartasaputra, H; Mallet, VN; Kuan, SS; Guilbault, GG (1980). «Fluorometric and colorimetric enzymic determination of triglycerides (triacylglycerols) in serum». Clinical Chemistry. 26 (5): 613–7. PMID 6894889 
  13. ↑ Chapman, Justin; Zhou, Mingjie (1999). «Microplate-based fluorometric methods for the enzymatic determination of l-glutamate: application in measuring l-glutamate in food samples». Analytica Chimica Acta. 402 (1–2): 47–52. doi:10.1016/S0003-2670(99)00533-4 
  14. ↑ Haggerty, Roy; Martí, Eugènia; Argerich, Alba; Von Schiller, Daniel; Grimm, Nancy B. (2009). «Resazurin as a 'smart' tracer for quantifying metabolically active transient storage in stream ecosystems». Journal of Geophysical Research. 114 (G3): G03014. Bibcode:2009JGRG..114.3014H. doi:10.1029/2008JG000942 
  15. ↑ [1] 
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