Biolística

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Sistema de Entrega de partículas PSD-1000/He


A biolística, também chamado de biobalística, é um método de transferência direta de genes em uma célula, com o objetivo de criação de organismos transgênicos. É o método de transferência direta mais usado para transformar células vegetais. [1] Consiste na propulsão dos genes de interesse no interior das células com a ajuda de um canhão de DNA, com o qual se modifica o DNA da célula.[2] [3] [4] [5] [6] [7] [8] [9] . O termo biolística deriva de um trocadilho com a palavra de balística.

Princípios[editar | editar código-fonte]

Utilizam-se microesferas de metal cobertas de DNA (bolas de ouro ou tungstênio de um micrón de diámetro). Projetam-se a enorme velocidade sobre as células que devem modificar com o fim de cruzar sua parede. Estas bolas atrasar-se-ão progressivamente cruzando as diferentes capas celulares. Algumas das células atingidas vão então a integrar espontaneamente os genes em seu genoma. Mas o núcleo da célula inclui o DNA de maneira aleatória.

Segundo as espécies, o período que tem de decorrer dantes de obter uma raça transgênica estável pode variar de alguns dias a vários meses. Este método utiliza-se também para efetuar a transformação dos genomas de orgánulos, cloroplastos ou mitocondrias. A transformação por biolística é uma alternativa interessante à transformação das plantas por Agrobacterium tumefaciens, já que não requer sequências exógenas para permitir a integração do fragmento de DNA.

O projeto[editar | editar código-fonte]

O sistema de biolística era originalmente uma pistola de ar comprimido Crosman modificada para disparar partículas densas de tungstênio. Ela foi inventada por John C Sanford, Ed Wolf e Nelson Allen na Universidade Cornell,[10] [11] [12] e Ted Klein da DuPont, entre 1983 e 1986.

Referências

  1. André Gallais, Agnès Ricroch;. «Plantes transgéniques, faits et enjeux, éditions Quae 2006». ISBN 2-7592-0001-9. Consultado em 15 de julho de 2010. 
  2. OGM Description - Méthodes d'obtention - Domaines d'application, Francine Casse et Jean-Christophe Breitler, Ed France Agricole, 2001
  3. Sanford, J. C., T. M. Klein, et al. (1987). "Delivery of substances into cells and tissues using a particle bombardment process." Journal of Particulate Science and Technology 5: 27-37
  4. Klein, T. M., E. D. Wolf, et al. (1987). "High-velocity microprojectiles for delivering nucleic-acids into living cells." Nature 327(6117): 70-73.
  5. Ishida, Y., Y. Hiei, et al. (2007). "Agrobacterium-mediated transformation of maize." Nature Protocols 2(7): 1614-1621.
  6. Ishida, Y., H. Saito, et al. (1996). "High efficiency transformation of maize (Zea mays L.) mediated by Agrobacterium tumefaciens." Nature Biotechnology 14(6): 745-750.
  7. Tingay, S., D. McElroy, et al. (1997). "Agrobacterium tumefaciens-mediated barley transformation." Plant Journal 11(6): 1369-1376.
  8. Frame, B. R., H. Y. Zhang, et al. (2000). "Production of transgenic maize from bombarded type II callus: Effect of gold particle size and callus morphology on transformation efficiency." In Vitro Cellular & Developmental Biology-Plant 36(1): 21-29.
  9. Gan W, Grutzendler J, Wong WT, Wong ROL, Lichtman JW, Multicolor DiOlistic Labeling of the Nervous System Using Lipophilic Dye Combinations Neuron Volume 27, Issue 2, 219-225
  10. Segelken, Roger (14 de maio 1987). «Biologist invent gun for shooting cells with DNA» (PDF). Cornell Chronicle. p. 3. Consultado em 24 de abril de 2016. 
  11. Sanford, J.C.; Klein, T,.M.; Wolf, E.D.; Allen, N. (1987). "Delivery of substances into cells and tissues using a particle bombardment process". Particulate Science and Technology 5 (1) p. 27-37. DOI:10.1080/02726358708904533.
  12. Klein, T.M.; Wolf, E.D.; Wu, R.; Sanford, J.C.. (Maio de 1987). "High-velocity microprojectiles for delivering nucleic acids into living cells". Nature 327 p. 70-73. DOI:10.1038/327070a0.