Reagente de Ellman (DTNB)
Reagente de Ellman (DTNB) Alerta sobre risco à saúde[1] | |
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Outros nomes | 3,3′-Disulfanediylbis(6-nitrobenzoic acid) 5-(3-Carboxy-4-nitrophenyl)disulfanyl-2-nitrobenzoic acid Dithionitrobenzoic acid 5,5′-Dithiobis(2-nitrobenzoic acid) |
Identificadores | |
Abreviação | DTNB |
Número CAS | |
PubChem | |
ChemSpider | |
ChEBI | |
SMILES |
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InChI | 1/C14H8N2O8S2/c17-13(18)9-5-7(1-3-11(9)15(21)22)25-26-8-2-4-12(16(23)24)10(6-8)14(19)20/h1-6H,(H,17,18)(H,19,20)
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Propriedades | |
Fórmula química | C14H8N2O8S2 |
Massa molar | 396.31 g mol-1 |
Ponto de fusão |
240-245 °C, 268 K, -169 °F |
Página de dados suplementares | |
Estrutura e propriedades | n, εr, etc. |
Dados termodinâmicos | Phase behaviour Solid, liquid, gas |
Dados espectrais | UV, IV, RMN, EM |
Exceto onde denotado, os dados referem-se a materiais sob condições normais de temperatura e pressão Referências e avisos gerais sobre esta caixa. Alerta sobre risco à saúde. |
O reagente de Ellman (5,5'-ditiobis-(ácido 2-nitrobenzóico) ou DTNB) é um produto químico usado para quantificar o número ou a concentração de grupos tiol em uma amostra. Foi desenvolvido por George L. Ellman.[2]
Preparação[editar | editar código-fonte]
No artigo de Ellman (1959),[2] ele preparou este reagente oxidando 2-nitro-5-clorobenzaldeído ao ácido carboxílico, introduzindo o tiol via sulfeto de sódio e acoplando o monômero por oxidação com iodo . Hoje, este reagente está prontamente disponível comercialmente.
Teste de Ellman[editar | editar código-fonte]
Tióis reagem com este composto, clivando a ligação dissulfeto para dar 2-nitro-5-tiobenzoato (TNB−), que ioniza para o di-ânion TNB2− em água em pH neutro e alcalino. Este íon TNB 2− tem uma cor amarela.
Essa reação é rápida e estequiométrica, com a adição de um mol de tiol liberando um mol de TNB. O TNB 2- é quantificado em um espectrofotômetro medindo a absorbância da luz visível em 412 nm, usando um coeficiente de extinção de 14.150 M -1 cm -1 para soluções tampão diluídas,[3][4] e um coeficiente de 13.700 M -1 cm -1 para altas concentrações de sal, como 6 M cloridrato de guanidínio ou 8 M uréia.[4] Infelizmente, o coeficiente de extinção para soluções diluídas foi subestimado na publicação original de 1959, pois 13.600 M -1 cm −1, e como observado em um artigo recente, esse erro persistiu na literatura.[5] O DTNB comercial pode não ser completamente puro, por isso pode exigir recristalização para obter resultados completamente precisos e reprodutíveis.[4]
O reagente de Ellman pode ser usado para medir tióis de baixa massa molecular, como glutationa, tanto em soluções puras quanto em amostras biológicas, como sangue.[6] Também pode medir o número de grupos tiol nas proteínas.[6]
Referências[editar | editar código-fonte]
- ↑ 5,5′-Dithiobis(2-nitrobenzoic acid) at Sigma-Aldrich
- ↑ a b Ellman GL (1959). «Tissue sulfhydryl groups». Arch. Biochem. Biophys. 82 (1): 70–7. PMID 13650640. doi:10.1016/0003-9861(59)90090-6
- ↑ Collier HB (1973). «Letter: A note on the molar absorptivity of reduced Ellman's reagent, 3-carboxylato-4-nitrothiophenolate». Anal. Biochem. 56 (1): 310–1. PMID 4764694. doi:10.1016/0003-2697(73)90196-6
- ↑ a b c «[8] Reassessment of Ellman's reagent». Reassessment of Ellman's reagent. Col: Methods in Enzymology. 91. [S.l.: s.n.] 1983. pp. 49–60. ISBN 978-0-12-181991-0. PMID 6855597. doi:10.1016/S0076-6879(83)91010-8
- ↑ Riener CK, Kada G, Gruber HJ (2002). «Quick measurement of protein sulfhydryls with Ellman's reagent and with 4,4'-dithiodipyridine». Anal Bioanal Chem. 373 (4–5): 266–76. PMID 12110978. doi:10.1007/s00216-002-1347-2
- ↑ a b Riener, Christian K.; Kada, Gerald; Gruber, Hermann J. (1 de julho de 2002). «Quick measurement of protein sulfhydryls with Ellman's reagent and with 4,4′-dithiodipyridine». Analytical and Bioanalytical Chemistry (em inglês). 373 (4–5): 266–276. ISSN 1618-2642. PMID 12110978. doi:10.1007/s00216-002-1347-2