Discussão:Anticorpo monoclonal

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Isolamento dos Hibridomas utilizando um meio de seleção HAT

   "Depois dos hibridomas fundidos com a ajuda do Polyethylene Glycol (PEG), era preciso desenvolver uma método de seleção capaz de separar as células fusionadas híbridas das células não fusionadas. Nesta segunda fase do protocolo, os hibridomas são isolados das células de mieloma da mistura de fusão por drogas. Este passo é necessário, pois células de mieloma freqüentemente dividem-se mais rapidamente que células do hibridoma que logo seriam excluídas do meio de cultura por competição. Estes mielomas não expressam a enzima hipoxantina fosforribosil transferase (HPRT), que catalisa um passo da via de hipoxantina a purina, uma via biossintética alternativa para síntese de DNA e replicação. De acordo com este fato, cultiva-se a mistura de fusão em um meio contendo hipoxantina aminopterina e timidina (HAT). A aminopterina bloqueia a principal via de síntese de purinas e pirimidinas; assim células de mieloma, que já não expressam a enzima HPRT, num meio HAT, não podem se multiplicar. As células do hibridoma se dividem normalmente, uma vez que apresentam atividade da HPRT herdadda do linfócito B esplênico parental, podendo assim, usar a hipoxantina como substrato para síntese de DNA. Os linfócitos B não crescem em cultura, e somente as células de hibridoma persistem quando cultivadas continuamente em um meio de selação HAT.
   Finalmente a mistura de hibridomas purificada é selecionada para identificação e isolamento de clones que secretam um anticorpo que interage com o antígeno desejado. Isto geralmente é feito a partir da diluição da suspensão dos hibridomas, obtendo-se então os clones que secretam determinado anticorpo monoclonal por técnicas imunoquímicas". (FRANKS; TEICH, 1990)