Discussão:Técnica de Gram

A parede das bactérias Gram negativas como a das Gram positivas, é formada de peptidoglicano, e portanto ambas são coradas durante a primeira etapa da coloração de Gram. A membrana externa das Gram negativas é permeável ao corante e não impede esta coloração. Se observarmos ao microscópio as bactérias após esta primeira etapa de coloração (antes da descoloração com o álcool) tanto Gram positivas quanto Gram negativas aparecerão coloridas de roxo. O que ocorre é que a camada de peptidoglicano das Gram negatvas é muito menos espessa do que a das Gram positivas. Assim na segunda etapa da técnica de coloração, quando a lâmina é submetida à lavagem com álcool, somente as bactérias Gram negativas perdem a coloração. As Gram positivas, tendo absorvido muito mais o corante devido a espessura do peptidoglicano, não se descoloram totalmente, mantendo a coloração arroxeada do primeiro corante. Em seguida, a segunda coloração com safranina (ou fucsina) cora de rosa apenas as Gram negativas, pois as Gram positivas mantém a cor do primeirto corante (roxo). O que direncia Gram positivas de Gram negativas é na realidade a etapa de descoloração com o álcool.