EcoRI

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EcoRI
Estrutura cristalográfica da endonuclease EcoRI
Indicadores
Pfam PF02963
InterPro IPR004221
SCOP 1na6

EcoRI (pronunciado "eco érre um") é uma enzima isolada a partir de cepas de Escherichia coli e faz parte do sistema de restrição-modificação.

Em biologia molecular é utilizada como uma enzima de restrição. Ela cria extremidades coesivas com saliências na extremidade 5' de moléculas de DNA. A sequência de ácido nucleico em que ocorrem os cortes é GAATTC, que tem como sequência complementar CTTAAG.[1] [2]

A enzima de restrição EcoRI reconhece o sítio indicado e o corte padrão é destacado com a linha verde.

Esta enzima é utilizada em uma grande variedade de técnicas de genética molecular, incluindo a clonagem, triagem de DNA e supressão de segmentos de DNA in vitro. As enzimas de restrição como a EcoRI, que geram extremidades coesivas de DNA são muitas vezes utilizadas para cortar o DNA antes da reação de ligação. EcoRI pode exibir corte não-específico, dependendo das condições presentes na reação. Estas condições incluem baixa concentração de sal, concentração de glicerol elevada, quantidade excessiva de enzima presente na reação, pH elevado e contaminação por certos solventes orgânicos.[3]

Referências

  1. Pingoud, A., Jeltsch, A.. (2001). "Structure and function of type II restriction endonucleases". Nucl. Acids Res 29 (18): 3705–3727. DOI:10.1093/nar/29.18.3705. PMID 11557805.
  2. Kurpiewski, M. R., Engler, L. E., Wozniak, L. A., Kobylanska, A., Koziolkiewicz, M., Stec, W. J, Jen-Jacobson, L. (2004). "Mechanisms of coupling between DNA recognition and catalysis in EcoRI endonucleases". Structure 12: 1775–1788. DOI:10.1016/j.str.2004.07.016. PMID 15458627.
  3. http://www.neb.com/nebecomm/products/faqproductR0101.asp#1