Sequenciamento de DNA: diferenças entre revisões
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* Darnell, J., Lodish, H., Baltimore, D.. **Molecular Cell Biology.** Second Edition. Scientific American Books. Distributed by W. H. Freeman and Company, New York. p. 213. 1990. |
* Darnell, J., Lodish, H., Baltimore, D.. **Molecular Cell Biology.** Second Edition. Scientific American Books. Distributed by W. H. Freeman and Company, New York. p. 213. 1990. |
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==Ligações externas== |
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* http://www.lgcm.icb.ufmg.br/sequenciamento.php (Esquema dos métodos de Sanger e de pirosequenciamento) |
* http://www.lgcm.icb.ufmg.br/sequenciamento.php (Esquema dos métodos de Sanger e de pirosequenciamento) |
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* http://microciencia.wordpress.com/2009/11/09/novas-tecnologias-de-sequenciamento-pirosequenciamento/ |
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[[Categoria:Biologia molecular]] |
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Revisão das 21h38min de 13 de agosto de 2010
 | Este artigo ou secção contém uma lista de referências no fim do texto, mas as suas fontes não são claras porque não são citadas no corpo do artigo, o que compromete a confiabilidade das informações. (Maio de 2009) |
O sequenciamento (português brasileiro) ou sequenciação (português europeu) de DNA é uma série de métodos bioquímicos que têm como finalidade determinar a ordem das bases nitrogenadas adenina (A), guanina (G), citosina (C) e timina (T) da molécula de DNA.
Métodos de sequenciamento
O método tradicional de sequenciamento de DNA foi proposto por Frederick Sanger na década de 70 e consiste na adição de nucleotídeos modificados, chamados didesoxirribonucleotídeos, que impedem o crescimento de um fragmento de DNA em replicação pela DNA polimerase após sua adição. Tem sido largamente utilizado por centros de pesquisa ao redor do globo.
O método de pirosequenciamento consiste em uma nova abordagem molecular do sequenciamento e se beneficia de uma técnica capaz de captar a emissão de luz causada pela adição de uma luciferase, acoplada à polimerização do DNA previamente fragmentado e aderido a microesferas, com o uso de sequências adaptadoras.
Método de Sanger
Pelo método de Sanger, uma fita simples de DNA que será sequenciada, é hibridizada com um primer de desoxinucleotídeos marcado na ponta 5´ (cinco linha). Quatro misturas de reação são preparadas onde os primers utilizados serão elongados por uma DNA polimerase. Cada mistura contém os quatro desoxinucleosídeos trifosfato normais mais um dos quatro didesoxinucleosídeos trifosfato em uma razão de aproximadamente 1/100. Uma vez que um didesoxinucleotídeo não tem ponta 3´-OH, não é possível haver elongação a partir do nucleotídeo adicionado, parando a reação. Desta forma, cada mistura de reação produzirá cadeias prematuramente terminadas de acordo com toda ocorrência de um didesoxinucleotídeo adicionado. Cada mistura é então separada em um gel de sequenciamento por eletroforese para se detectar cada um dos nucleotídeos presentes na sequência de DNA lida.
Métodos modernos - 454
Um novo método de sequenciamento de DNA, usualmente chamado de pirosequenciamento, foi desenvolvido pela Roche Applied Sciences [1]. Através deste método, pode-se sequenciar genomas de organismos diversos de uma maneira muito mais rápida e barata.
Referências
Bibliografia
- Darnell, J., Lodish, H., Baltimore, D.. **Molecular Cell Biology.** Second Edition. Scientific American Books. Distributed by W. H. Freeman and Company, New York. p. 213. 1990.
Ligações externas
- http://www.lgcm.icb.ufmg.br/sequenciamento.php (Esquema dos métodos de Sanger e de pirosequenciamento)
- http://microciencia.wordpress.com/2009/11/09/novas-tecnologias-de-sequenciamento-pirosequenciamento/