Testes de detecção de antigénios de paludismo
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Os testes de detecção de antigénios da malária são um grupo de testes de diagnóstico rápido comercialmente disponíveis do tipo de teste rápido de antigénios que permitem o diagnóstico rápido da malária por pessoas que, de outra forma, não são qualificadas nas técnicas laboratoriais tradicionais para o diagnóstico da malária ou em situações em que tal equipamento não está disponível. Existem actualmente mais de 20 testes deste tipo comercialmente disponíveis (testes de produto da OMS 2008). O primeiro antigénio do paludismo adequado como alvo para tal teste foi uma enzima glicolítica solúvel Glutamato desidrogenase.[1][2][3] Nenhum dos testes rápidos é actualmente tão sensível como uma película de sangue espessa, nem tão barato. Uma grande desvantagem na utilização de todos os métodos actuais de vareta é que o resultado é essencialmente qualitativo. Em muitas áreas endémicas da África tropical, no entanto, a avaliação quantitativa da parasitemia é importante, uma vez que uma grande percentagem da população testará positivo em qualquer ensaio qualitativo.
Testes de Diagnóstico Rápido da Malária baseados em antigénio[editar | editar código-fonte]
A malária é uma doença curável se os pacientes tiverem acesso a diagnóstico precoce e tratamento imediato. Os testes de diagnóstico rápido baseados em antigénios (TDR) têm um papel importante na periferia da capacidade dos serviços de saúde porque muitas clínicas rurais não têm a capacidade de diagnosticar o paludismo no local devido à falta de microscópios e de técnicos treinados para avaliar as radiografias de sangue. Além disso, em regiões onde a doença não é endémica, os técnicos de laboratório têm uma experiência muito limitada na detecção e identificação de parasitas da malária. Um número cada vez maior de viajantes de zonas temperadas visita anualmente países tropicais e muitos deles regressam com uma infecção de malária. Os testes RDT ainda são considerados como complementos da microscopia convencional, mas com algumas melhorias pode muito bem substituir o microscópio. Os testes são simples e o procedimento pode ser realizado no local em condições de campo. Estes testes utilizam sangue de dedo ou sangue venoso, o teste completo demora um total de 15-20 minutos, e não é necessário um laboratório. O limiar de detecção por estes testes de diagnóstico rápido situa-se na gama de 100 parasitas/µl de sangue em comparação com 5 por microscopia de película espessa.
pGluDH[editar | editar código-fonte]
Glutamato de Plasmodium desidrogenase (pGluDH) precipitado por anticorpos do hospedeiro Um diagnóstico preciso torna-se cada vez mais importante, tendo em conta a crescente resistência do Plasmodium falciparum e o elevado preço das alternativas à cloroquina. A enzima pGluDH não ocorre no glóbulo vermelho do hospedeiro e foi recomendada como enzima marcadora para espécies de Plasmodium por Picard-Maureau et al. em 1975. O teste da enzima marcadora da malária é adequado para trabalho de rotina e é agora um teste padrão na maioria dos departamentos que lidam com a malária. Sabe-se que a presença de pGluDH representa a viabilidade do parasita e que um teste de diagnóstico rápido utilizando pGluDH como antigénio teria a capacidade de diferenciar organismos vivos de organismos mortos. Um RDT completo com pGluDH como antigénio foi desenvolvido na China e está agora a ser submetido a ensaios clínicos. Os pGluDH são enzimas ubíquas que ocupam um importante ponto de intersecção entre o metabolismo do carbono e do azoto. Tanto a nicotinamida adenina dinucleótido (NAD) [EC 1.4.1.2] como a nicotinamida adenina dinucleótido fosfato (NADP) dependente de GluDH [EC 1.4.1.4] estão presentes em Plasmodia; o GluDH dependente de NAD é relativamente instável e não é útil para fins de diagnóstico. A glutamato desidrogenase fornece uma fonte de carbono oxidável utilizada para a produção de energia, bem como um portador de electrões reduzido, NADH. O glutamato é um doador principal de aminoácidos para outros aminoácidos em reacções de transaminação subsequentes. Os múltiplos papéis do glutamato no equilíbrio do azoto fazem dele uma porta de entrada entre o amoníaco livre e os grupos de aminoácidos da maioria dos aminoácidos. A sua estrutura cristalina é publicada. A actividade de GluDH em P.vivax, P.ovale e P. malariae nunca foi testada, mas dada a importância do GluDH como enzima de ponto de ramificação, cada célula deve ter uma alta concentração de GluDH. É bem conhecido que as enzimas com um elevado peso molecular (como o GluDH) têm muitos isozimas, o que permite diferenciações de estirpes (dado o anticorpo monoclonal correcto). O hospedeiro produz anticorpos contra a enzima parasita, o que indica uma baixa identidade de sequência.
Proteína rica em histidina II[editar | editar código-fonte]
A proteína II rica em histidina (HRP II) é uma proteína rica em histidina e alanina, solúvel em água, que está localizada em vários compartimentos celulares, incluindo o citoplasma parasita. O antigénio é expresso apenas pelos trofozoítos de P. falciparum. O HRP II de P. falciparum tem sido implicado na biocralização da hemozoína, uma forma inerte e cristalina de ferriprotoporfirina IX (Fe(3+)-PPIX) produzida pelo parasita. Uma quantidade substancial do HRP II é secretada pelo parasita na corrente sanguínea do hospedeiro e o antigénio pode ser detectado em eritrócitos, soro, plasma, líquido cefalorraquidiano e mesmo urina como uma proteína hidrossolúvel secretada. Estes antigénios persistem no sangue circulante depois de a parasitemia ter sido eliminada ou reduzida em grande parte. Geralmente demora cerca de duas semanas após o tratamento bem sucedido dos testes baseados no HRP2 para se tornar negativo, mas pode demorar até um mês, o que compromete o seu valor na detecção de infecção activa. Foram relatados falsos resultados positivos de vareta em doentes com artrite reumatóide com factor reumatóide positivo. Uma vez que o HRP-2 é expresso apenas por P. falciparum, estes testes darão resultados negativos com amostras contendo apenas P. vivax, P. ovale, ou P. malariae; muitos casos de malária não-falciparum podem, portanto, ser erradamente diagnosticados como malária negativa (algumas estirpes de P. falciparum também não têm HRP II). A variabilidade dos resultados das RDT baseadas em pHRP2 está relacionada com a variabilidade do antigénio alvo.
pLDH[editar | editar código-fonte]
P. falciparum lactate dehydrogenase (PfLDH) é uma oxidoreductase de 33 kDa [EC 1.1.1.27]. É a última enzima da via glicolítica, essencial para a geração de ATP e uma das enzimas mais abundantes expressas pelo P. falciparum. Plasmodium LDH (pLDH) de P. vivax, P. malariae, e P. ovale) apresentam uma identidade de 90-92% para o PfLDH de P. falciparum. Os níveis de pLDH foram reduzidos no sangue mais cedo após o tratamento do que o HRP2. A este respeito, o pLDH é semelhante ao pGluDH. No entanto, as propriedades cinéticas e sensibilidades aos inibidores visados pelo local de ligação do co-factor diferem significativamente e são identificáveis através da medição de constantes de dissociação para inibidores que, diferem até 21 vezes.
pAldo[editar | editar código-fonte]
Fructose-bisfosfato aldolase [EC 4.1.2.13] catalisa uma reacção chave na glicólise e na produção de energia e é produzido pelas quatro espécies. A P.falciparum aldolase é uma proteína de 41 kDa e tem 61-68% de sequência semelhante a aldolases eucarióticas conhecidas. A sua estrutura cristalina foi publicada. A presença de anticorpos contra a p41 nos soros de adultos humanos parcialmente imunes à malária sugere que a p41 está implicada na resposta imunitária protectora contra o parasita.
Referências
- ↑ Ling IT.; Cooksley S.; Bates PA.; Hempelmann E.; Wilson RJM. (1986). «Antibodies to the glutamate dehydrogenase of Plasmodium falciparum» (PDF). Parasitology. 92 (2): 313–324. PMID 3086819. doi:10.1017/S0031182000064088
- ↑ Rodríguez-Acosta A, Domínguez NG, Aguilar I, Girón ME (1998). «Characterization of Plasmodium falciparum glutamate dehydrogenase-soluble antigen». Braz J Med Biol Res. 31 (9): 1149–1155. PMID 9876282. doi:10.1590/S0100-879X1998000900008
- ↑ Li Y, Ning YS, Li L, Peng DD, Dong WQ, Li M (2005). «Preparation of a monoclonal antibodies against Plasmodium falciparum glutamate dehydrogenase and establishment of colloidal gold-immunochromatographic assay». Di Yi Jun Yi da Xue Xue Bao = Academic Journal of the First Medical College of PLA. 25 (4): 435–438. PMID 15837649